1 儀器
精密電子天平（型號：PB203-N，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；4℃冰箱（BCD-205E/Y，海爾集團）；蘇泊爾微電磁爐 （型號：C19A01-A，浙江蘇泊爾股份有限公司）；智能生化培養箱（上海一恒科學儀器有限公司）；振蕩培養箱（上海一恒科學儀器有限公司）；立式壓力蒸汽滅菌器（型號：LDZX-50KBS
，上海申安醫療器械廠）；電熱恒溫鼓風干燥箱（DHG-9240A，上海精宏實驗設備有限公司）；無菌操作臺（型號：JB-VS-840U，蘇州佳寶凈化工程設備有限公司）；精密試紙（pH 6.4-8.0，上海三愛思試劑有限公司）；可調微量鎖緊移液器（型號：WKYⅣ-5，上海佳音分析儀器廠）；燒杯（50mL、100mL、500mL、1000mL 和2000mL）；量筒（50mL、100mL、250mL 和 1000mL）；錐形瓶（100mL、250mL 和 500mL）；分液漏斗（250mL）；10mL 移液管；紗布；微量移液器和槍頭（20μL，200μL 和 1000μL）；接種環；酒精燈；脫脂酒精棉；培養皿；玻璃棒。
2 實驗方法
2.1 未知菌株的發現
無菌條件下，培養本實驗室保存的放線菌 A45，從中挑取未知菌種進行分離純化培養，挑取純化的單個菌落，點在密集劃線的正常放線菌 A45 平板上，放培養箱 28℃倒置培養 48h 觀察。
2.2 未知菌株的發酵培養
無菌條件下，挑取未知菌株單個菌落接種于高氏一號培養液，置于振蕩培養箱內以 200r/min 28℃振蕩培養 4d。待大部分孢子成熟后，即可用于發酵培養。按照 8%（20mL）的接菌量接種于新的高氏一號培養液中，置于振蕩培養箱內以 200r/min 28℃振蕩培養 4d。
2.3 抑菌活性物質的萃取濃縮
將澄清的發酵液用有機溶劑進行萃取。加入 1/4 體積的有機溶劑，充分攪拌后靜置 4h，收集有機相和水相，用濾紙片法檢測各相萃取液的抑菌活性，將有活性相萃取三次后分別合并。將合并相于 70℃下旋轉蒸發濃縮，4℃保存備用。
2.4 活性物質的抑菌實驗
2.4.1 濾紙片法
無菌條件下，用無菌鑷子夾取直徑為 5mm 的圓形無菌濾紙片分別放入需檢測的溶液中，充分浸泡，2h 后取出無菌風干，備用。將活化好的供試菌株密集劃線接種于無菌平板上，用鑷子夾取風干的濾紙片放在接種的平板上。放入培養箱。37℃倒置培養 24h，觀察結果。
2.4.2 微量肉湯稀釋法
無菌操作，將制備的濃度相當于 0.5 麥氏比濁標準的菌懸液，經肉湯 1∶1000 稀釋后分別加到無菌 96 孔聚苯乙烯板中的第 1-11 孔，每孔中加 180μl。將不同濃度梯度的粗提物溶液分別加到上述 1-10 孔中，每孔 20μl，第11 孔不加粗提物作為生長對照。使第 1-11 孔最終粗 提 物 濃 度 分 別 為 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0mg/ml，將 96 孔板密封后置 35℃普通空氣孵育箱中，孵育 24h，用酶標儀在 630nm 處檢查吸光度值，記錄實驗數據。
